擴增子測序是指對基因組特定區域進行PCR擴增并進行高通量測序,用來研究特定區域序列變異的方法。在微生物領域,常見擴增子測序包括研究環境樣本微生物多樣性的16S/18S/ITS等擴增子測序和研究碳/氮/磷/硫循環、重金屬循環、耐藥等功能基因多樣性的擴增子測序。
人體微生物組與疾病健康、根基微生物與植物互作、微生物資源發現、微生物發酵、污水處理、氣候變暖、環境檢測等。
16s rDNA具有9個保守區和9個高變區。保守區反映生物物種間的親緣關系,高變區反映物種間的差異,其中V4-V5區特異性好,數據庫信息全。
18s rDNA為編碼真核生物核糖體小亞基rRNA的DNA序列,反映樣品中真核生物之間的種類差異。V4區使用最多、數據庫信息最全、分類效果最好。
該類測序主要對環境微生物中的真菌多樣性進行分析。包含兩個區域:ITS1位于真核生物核糖體rDNA序列18s和5.8s之間;ITS2位于真核生物核糖體rDNA序列5.8s和28s之間。ITS1和ITS2長度分別為350bp和400bp
基于特定功能通路(如氨氧化、碳固定、磷溶解等)的關鍵基因序列設計引物,用該引物進行PCR擴增,建庫后進行高通量測序。功能基因測序可有效研究自然環境中的特定功能的基因多樣性和其背后的微生物物種信息,并與每個采樣點的環境因子相結合,同時分析環境因子與功能細菌群落結構的關系,因此對復雜環境中的微生物構成研究有重要的指導作用。

DNA:總量 ≥ 1 μg,濃度 ≥ 10 ng/μL,1.8 ≤ OD260/280 ≤ 2.0,
DNA電泳條帶清晰,無降解或者輕度降解,不要反復凍融。

a、水體濾膜(孔徑 0.22-0.45μm/直徑 3-4cm)≥1 L水樣過濾富集的濾膜,空氣濾膜有明顯顏色沉淀在濾膜上
b、食品表面拭子建議10個,最低5個







期刊:gut pathogens 發表時間:2022年12月 單位:中國人民解放軍總醫院
Crohn病(Crohn’s disease,CD)是一種慢性的腸道炎癥性疾病,可影響消化道的任何部位,屬于炎癥性腸病(IBD)的一種。cd是一種自身免疫性疾病,目前尚未完全了發病的具體原因,但遺傳、環境和免疫因素都可能對其發病起到作用。治療CD的方法包括抗炎藥物、免疫抑制劑、生物制劑、手術等。新出現的證據表明,腸道微生物群在CD中起著主導作用,然而CD患者早期的微生物組改變仍不清楚。本研究旨在識別早期CD患者的細菌功能失調,并探索與CD進展相關的特異性腸道細菌。
本研究納入中國CD縱向前瞻性隊列,包括18例早期CD患者、22例晚期CD患者和30例健康對照者。采用針對16S核糖體DNA(rDNA)基因V3-V4區的Illumina HiSeq測序技術對微生物群落進行了研究。分析了腸道微生物群與Crohn病臨床特征的關系。

